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病毒RNA提取试剂盒图片
产品货号:
QN0924
中文名称:
病毒RNA提取试剂盒
英文名称:
RNA Viral Genome Extraction Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。



产品组成:
组分50T100T
蛋白酶K1mL1mL×2
洗柱液50mL50mL×2
结合液25mL50mL
漂洗液15mL15mL×2
RNase-free ddH2O15mL15mL×2
RNase-free吸附柱50个100个
RNase-free收集管(2mL)50个100个

保存:室温,其中蛋白酶K置于-20℃,有效期1年。

注意事项:
  • 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
  • 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的RNA提取量也下降。
  • 若结合液中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解。
  • 如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。
  • 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率。
  • RNA产物应保存在-70℃,以防RNA降解。


使用方法:
使用前请先在漂洗液中加入60mL无水乙醇。所有离心步骤均在2~8℃条件下进行。
  • 取病毒上清液0.5mL,12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。
  • 向病毒上清中加入20μL 10mg/mL的蛋白酶K,充分混匀,65℃消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次。
  • 吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700μL洗柱液,室温放置2分钟,2~8℃ 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。
  • 向病毒上清中加入500μL结合液,充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。
    吸附柱的最大容积为750μL,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。
  • 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  • 向吸附柱中加入700μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  • 向吸附柱中加入500μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
  • 12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
  • 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50μL~100μL经65℃水预热的RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm离心2min。即可得到高质量的病毒基因组RNA。


附录参考:
RNA检测:

得到的基因组RNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA,所以常规电泳无法检测,只有后期实验才可检测到。D260值为1相当于大约40μg/mL单链RNA。


相关搜索:病毒RNA提取试剂盒RNA Viral Genome Extraction Kit
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